抗体品种繁复,品牌众多,技术参数纷歧,价格和质量更是相差甚大,怎么购买到高质量价格适宜的抗体,并地做出我们想要的成果,其中有许多细节需求留意。
一、一抗的挑选
1.断定抗体的姓名,留意中英文姓名、它名、亚型等信息。
2.断定您的试验类型,ELISA,WB,IHC,ICC,仍是FACS。一般抗体的阐明书都会列出该抗体经验证过适用于何种试验的类型,假如抗体阐明书没有提及的使用类型,并不意味着该抗体不适用于此种剖析使用类型,而仅是阐明尚未经过此种试验验证,请依据阐明书列出的已验证的类型来挑选适宜您试验的抗体。
3.断定试验样本的种属,Human,Mouse,仍是Rat。一般抗体阐明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种试验,请依据阐明书列出已验证的种属来挑选适宜您试验的抗体。
4.样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于挑选最适宜的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改动,会影响抗体的免疫亲和反响。
5.单多克隆抗体的挑选。市面上的抗体仍是以多克隆抗体为主,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易呈现非特异性染色(能够经过封闭等避免)。
二、二抗的挑选
1.种属来历。首要依据一抗种属来历来决议购买二抗来历,如一抗是小鼠来历,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
2.符号物的挑选。有HRP、Biotin、荧光素等符号物。一般SP三步法二抗挑选Biotin符号的二抗,以与后边的SP结合反响,而免疫荧光染色就需求购买不同荧光素符号的二抗,如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
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